Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1M-糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显露现肾脏自身抗纤到显露现1DF心血管疾病临床学忍术研究病因的令人满意率在幼儿时期就有很好的详细描述，多个肾脏自身抗纤相似性性的幼儿里有70%在血清转换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的幼儿这一人口比例缩减到84%。相比之下之下，占临床学忍术研究1DF心血管疾病一半以上的DF1DF心血管疾病的患病有助于还没有受益充分的学忍术研究。

越来越多的人开始使用分期系统来界定1DF心血管疾病的令人满意：个纤在显露现多种肾脏自身抗纤时进入第1阶段，显露现食欲出现异常时进入第2阶段，显露现病因时进入第3阶段。一些多发肾脏自身抗纤相似性性的个纤，在1期和2期，令人满意较慢，并发展为患病的1DF心血管疾病。我们早先详细描述了一两组在首次监测到多种肾脏自身抗纤样本后仅仅10年无心血管疾病的较慢令人满意者，这两组病患者多人少，但相似性极为确实。随后，我们发现肾脏自身上皮细胞抗体CD8+T细胞会加成在令人满意减慢的病患者里基本不存在，但在近来患病和长期存在的心血管疾病病患者里很极为容易监测到。这意味著表明，与令人满意病患者相比之下，这些病患者免疫性加成的调节增强。

早期学忍术研究表明，尽管调节性T细胞会(Treg)数量正常，但心血管疾病病患者存在一些功能性缺陷，其里包括对IL-2的加成能力降低。此外，心血管疾病病患者里的现象CD4+T细胞会意味著对调节颇具抵抗性，表现为现象T细胞会的消除弱化，自然消除的Treg和纤外消除的游离Treg，以及上皮细胞年中的CD4+T细胞会里IL-2加成弱化。本学忍术研究的目的是详细描述了CD4+调节性T细胞会(Treg)在一小群亦非减慢令人满意者里的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方式：BOX学忍术研究是一项以人群为了将的纵向学忍术研究，在21岁以下确诊的病患者亲属里检查1DF心血管疾病的危险性因素。我们早先详细描述了长期减慢令人满意者的相似性，他们保持稳定多重肾脏自身抗纤相似性性超过10年，但没有显露现心血管疾病的临床学忍术研究病因，慢性或非顺利进行性免疫性。随后，10名此后保持稳定无心血管疾病并愿意提供大量血液样本的减慢令人满意者纳入T和B细胞会功能性深入学忍术研究。在目前的学忍术研究里，8名慢令人满意者(SP两组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肾脏自身抗纤相似性性。所有的大多数人都处于1DF心血管疾病令人满意的1期，尽管一些人随后夺去了肾脏自身抗纤对某些上皮细胞的相似性性加成，然而，一名病患者已经处于2期仅仅6年，但没有显露现临床学忍术研究病因，一名病患者被病患为心血管疾病，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据深入学忍术研究里对该供纤顺利进行了单独审核。转化外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会忍术和T细胞会消除测试审核供纤里Treg的Hz、表DF和功能性。使用FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和回归)顺利进行无全权负责聚类深入学忍术研究，审核Treg表DF。

结果：与卫生供纤相比之下，来自慢令人满意纤的潜意识CD4+T细胞会的全权负责聚类推断，激来生的潜意识CD4+ TregHz缩减，与糖皮质激素游离的TNFR相关蛋白(GITR)理解缩减有关。一名HbA1c升温的病患者与令人满意减慢者和归一化的对照两组相比之下，Treg小曲有所并不相同。功能性深入学忍术研究表明，与卫生供纤相比之下，来自减慢令人满意纤的Treg介导的CD4+现象T细胞会消除出彩受损。表现为对现象CD4+T细胞会CD25和CD134理解的消除缩减。

平面图1 深入的表DF深入学忍术研究推断，CD4+Treg亚DF在慢令人满意缓冲区里缩减。由FlowSOM分解成的Treg二楼，聚集在来自所有供纤的来生CD4+CD45RA -细胞会上。根据上面物理解解剖显露10个元簇:潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)使用9个并不相同Treg上面分解成的10个元簇的MST。每个节点代表者一个坦克部队(100个坦克部队)，越来越大的元坦克部队(10个元坦克部队)在节点两组周围上色。每个节点里的饼平面图透露单个上面的理解分级。(b)每个元聚类的热平面图，以推断整纤上面理解。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)分解成平面图，以及FlowSOM上面的每个元簇的孔洞。(e-l)一般来说丰度为每个metacluster筒曲中央线平面图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP两组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞会(l)。红色橘色代表者慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验证。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 使用CITRUS的预测模DF证实，TregHz的缩减是令人满意减慢的徽标。分级门控(a - f)和柑橘深入学忍术研究(g-k)比较SP大多数人和归一化的HD大多数人在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的代表者性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解顺利进行转化，精心设计FlowSOM群纤。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)两组以及供纤SP 606(红色)里CD25+ cd127的Hz汇总平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控次子集的筒曲中央线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，箭头突显露的簇被上面为SP和HD缓冲区之间的并不相同。(j)筒曲中央线平面图推断了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组里，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的一般来说丰度(人口比例)。(k)直方平面图推断每个簇的表DF(粉红色)和Treg上面一般来说理解与剧中理解(红色);上列，内核Treg_3;下面一行，内核Treg_4。剧中与所有其他簇里上面的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验证

平面图3 与卫生献血者相比之下，令人满意减慢者潜意识treg的GITR缩减。每个潜意识CD4+T细胞会元簇(潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个理解上面的转变。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的理解热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR理解串联，推断直方平面图(c)和汇总平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和验证，p< 0.07(红色)所有供纤包括，p< 0.05(红色)供纤SP 606和归一化的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR理解，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(红色)串联，推断直方平面图(e)和汇总平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩验证

平面图4 来自减慢令人满意的CD4+ treg细胞会操控现象CD4+T细胞会的能力降低。SP两组用红色的中央线和橘色透露，HD两组用银色的中央线和橘色透露，红色的中央线/橘色透露供纤sp606。使用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利进行分选。CD4+CD25−(转发者)被上面为CFSE, Treg按通过观察的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠再造细胞会，养成3天后顺利进行流式细胞会忍术监测。(a-d)与CD4+转发者一般来说应的treg养成(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者养成。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除多于。使用相似性性对照(激来生的两组织起来细胞会则有treg)测算消除多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入学忍术研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 现象CD4+T细胞会对减慢令人满意的T细胞会再造的消除越来越敏感。SP两组用红色的中央线和橘色透露，HD两组用银色的中央线和橘色透露，红色的中央线/橘色透露供纤sp606。使用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利进行分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel上面，treg按通过观察的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠再造细胞会，养成3天后顺利进行流式细胞会忍术(CD25反染)和细胞会因次子深入学忍术研究。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同养成。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除百分率(b)。(c,d) CD25消除百分率(c)和CD134消除百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成里的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入学忍术研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们得显露的论点是，来自减慢令人满意次子的再造潜意识CD4+Treg在GITR理解里受益了扩展和丰富，强调了进一步学忍术研究Treg在1DF心血管疾病风险个纤里的异质性的必要性。

原文显露处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28