Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程当中逐渐扩展

从第一次用到人体内自身抗本体到用到1型乳癌药理学呕吐的重大突破率在学龄前时期就有很好的说明了，多个人体内自身抗本体白血病的学龄前里面有70%在血清转换成后10年内患有乳癌，而随访15年的学龄前这一%-降低到84%。相对来说之下，%药理学1型乳癌一半以上的型1型乳癌的病症机制还没有得不到充分的险恶研究。

越来越多的人开始常用分期子系统来假定1型乳癌的重大突破：个本体在用到多种人体内自身抗本体时带入第1先决条件，用到胰岛素异常时带入第2先决条件，用到呕吐时带入第3先决条件。一些多发人体内自身抗本体白血病的个本体，在1期和2期，重大突破较慢，并持续发展为病症的1型乳癌。我们之后说明了了一第各别在首次监测到多种人体内自身抗本体采样后多于10年无乳癌的正因如此慢重大突破者，这第各别病症000人少，但大体特征非常确实。随后，我们发现人体内自身淋巴细胞基因表达CD8+T里面央线粒体反其所在重大突破快速的病症里面大体不存在，但在近期病症和近十年存在的乳癌病症里面很容易监测到。这可能指出，与重大突破病症相对来说，这些病症诱发反其所的恒定提升。

早期险恶研究指出，尽管恒定性T里面央线粒体(Treg)数量经常性，但乳癌病症存在一些机能有缺陷，其里面除此以外对IL-2的反其所能力减小。此外，乳癌病症里面的效其所CD4+T里面央线粒体可能对恒定凸显抵抗性，表现为效其所T里面央线粒体的抑止减弱，自然产生的Treg和本活体产生的抑止Treg，以及淋巴细胞经历的CD4+T里面央线粒体里面IL-2反其所减弱。本险恶研究的最终目标是说明了了CD4+恒定性T里面央线粒体(Treg)在这群人正因如此快速重大突破者里面的大体特征，他们的年长为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX险恶研究是一项以年轻人进一步将的横向险恶研究，在21岁以下不止院的病症亲属里面检验1型乳癌的致命因素。我们之后说明了了近十年快速重大突破者的大体特征，他们保持一致多重人体内自身抗本体白血病多达10年，但没有用到乳癌的药理学呕吐，慢性或非透过性诱发。随后，10名继续保持一致无乳癌并愿意缺少大量血液采样的快速重大突破者引入到T和B里面央线粒体机能归纳。在现先决条件的险恶研究里面，8名慢重大突破者(SP第各别)，里面位年长43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的人体内自身抗本体白血病。所有的与会者都处于1型乳癌重大突破的1期，尽管一些人随后夺去了人体内自身抗本体对某些淋巴细胞的白血病反其所，然而，一名病症已经处于2期多于6年，但没有用到药理学呕吐，一名病症被临床为乳癌，该成年人72岁，在采集测试采样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳里面对该供本体透过了单独归纳。受控外周血单个连锁反应里面央线粒体(PBMCs)，采用多参数流式里面央线粒体练成和T里面央线粒体抑止试验归纳供本体里面Treg的kHz、遗传和机能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、连续性和回归)透过无监督聚类归纳，归纳Treg遗传。

结果：与心理健康供本体相对来说，来自慢重大突破本体的知觉CD4+T里面央线粒体的监督聚类结果显示，激活的知觉CD4+ TregkHz降低，与抗生素抑止的TNFR关的蛋白(GITR)暗示降低有关。一名HbA1c升高的病症与重大突破快速者和给定的对照第各别相对来说，Treg谱有所相同。机能得不止正确性，与心理健康供本体相对来说，来自快速重大突破本体的Treg介导的CD4+效其所T里面央线粒体抑止明显受损。表现为对效其所CD4+T里面央线粒体CD25和CD134暗示的抑止降低。

绘不止1 险恶的遗传归纳结果显示，CD4+Treg亚型在慢重大突破缓冲区里面降低。由FlowSOM降解的Treg室，聚集在来自所有供本体的活CD4+CD45RA -里面央线粒体上。根据标有物暗示鉴定不止10个元簇:知觉T里面央线粒体_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T里面央线粒体;HLA-DR + GITR +知觉T里面央线粒体;内连锁反应Treg_1;内连锁反应Treg_2;内连锁反应Treg_3;和内连锁反应Treg_4。(a)常用9个相同Treg标有降解的10个元簇的MST。每个节点代表一个空降兵(100个空降兵)，更是大的元空降兵(10个元空降兵)在节点第各别附近上色。每个节点里面的饼绘不止声称单个标有的暗示级别。(b)每个元聚类的热绘不止，以结果显示整本体标有暗示。(c, d)为HD第各别(c)和SP第各别(d)降解绘不止，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较原兄量为每个metacluster箱里面央线绘不止(原兄量> 0.05%)确定为HD和SP第各别:内连锁反应Treg_2 (e),内连锁反应Treg_3 (f),内连锁反应Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T里面央线粒体(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T里面央线粒体(l)。粉红色白点代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推标记秩检验。此键适用于绘不止形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘不止2 常用CITRUS的预报证实，TregkHz的降低是重大突破快速的标志。国际标准奈斯(a - f)和柑橘归纳(g-k)比较SP与会者和给定的HD与会者在CD4+CD45RA−T里面央线粒体上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的代表性绘不止。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示透过受控，演示FlowSOM群本体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第各别以及供本体SP 606(粉红色)里面CD25+ cd127的kHz统计绘不止。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯兄集的箱里面央线绘不止;(c) HLA-DRloGITR−(内连锁反应Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内连锁反应Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内连锁反应Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内连锁反应T cell)。(g - i)龙眼簇球状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示气压着色，箭头突不止的簇被识别为SP和HD缓冲区密切关系的相同。(j)箱里面央线绘不止结果显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)第各别里面，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相较原兄量(%-)。(k)直方绘不止结果显示每个簇的遗传(粉红色)和Treg标有相较暗示与背景暗示(黄色);上列，内连锁反应Treg_3;示意图偷偷地，内连锁反应Treg_4。背景与所有其他簇里面标有的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推标记秩检验

绘不止3 与心理健康献血者相对来说，重大突破快速者知觉treg的GITR降低。每个知觉CD4+T里面央线粒体元簇(知觉T里面央线粒体_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T里面央线粒体;HLA-DR + GITR +知觉T里面央线粒体;内连锁反应Treg_2;内连锁反应Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个暗示标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的暗示热绘不止(sp606不除此以外在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR暗示相联，结果显示直方绘不止(c)和统计绘不止(d)。Wilcoxon类推标记秩和检验，p< 0.07(粉红色)所有供本体除此以外，p< 0.05(黄色)供本体SP 606和给定的HD不除此以外在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR暗示，从国际标准奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(粉红色)相联，结果显示直方绘不止(e)和统计绘不止(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推标记秩检验

绘不止4 来自快速重大突破的CD4+ treg里面央线粒体控制效其所CD4+T里面央线粒体的能力减小。SP第各别用黄色的里面央线和白点声称，HD第各别用灰色的里面央线和白点声称，粉红色的里面央线/白点声称供本体sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T里面央线粒体透过分选。CD4+CD25−(此番者)被标有为CFSE, Treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠重置里面央线粒体，培养3几天后透过流式里面央线粒体练成监测。(a-d)与CD4+此番者相较其所的treg培养(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止总和。常用白血病对照(激活的响其所里面央线粒体不含treg)计算抑止总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘不止5 效其所CD4+T里面央线粒体对快速重大突破的T里面央线粒体重置的抑止更是脆弱。SP第各别用黄色的里面央线和白点声称，HD第各别用灰色的里面央线和白点声称，粉红色的里面央线/白点声称供本体sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T里面央线粒体透过分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标有，treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠重置里面央线粒体，培养3几天后透过流式里面央线粒体练成(CD25反染)和里面央线粒体因兄归纳。HD Treg与HD、SP或sp606此番者协力培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止百份(b)。(c,d) CD25抑止百份(c)和CD134抑止百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在粗略估计里面的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

正确性：我们得不止的正确性是，来自快速重大突破兄的重置知觉CD4+Treg在GITR暗示里面得不到了引入和丰富，强调了进一步险恶研究Treg在1型乳癌风险个本体里面的异质性的实质。

原文不止处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28